A diploid potato seedling derived from a cross between a haploid-inducing pollinator and a highly regenerable clone of
Solatium phureja was transformed using
Agrobacterium tumefaciens LBA4404 with a construct bearing kanamycin resistance (
hptII) and the
S- GFP (green fluorescent protein) gene. From three leaf disks, 17 diploid and 12 tetraploid T
0 plants were regenerated. GFP expression was observed in leaves, tubers, flowers and embryos of transformed plants. After
self-pollination of T
0 diploids, 879 T
1 were found to express GFP over a wide continuous range, based on measurements using a GFP meter. Segregation of GFP expression
in the T
1 indicated that the diploid primary transformants likely contained two copies of the GFP gene. For three of five tetraploid
T
0, 15:1 segregation ratios of GFP expression:wild type in the T
1 supported double copy simplex insertion of the transgene. A segregation ratio of 35 GFP:1 wild type in a fourth tetraploid
T
1 family supported the likelihood of a single copy duplex insertion. The potential of using GFP as a marker to select against
transgenic hybrid seeds following attempted haploid extraction depends upon facile visualization of GFP positive seeds so
that the relatively few nontransgenics can be screened for haploidy. Stable GFP expression was found in various tissues of
six transgenic diploids; however, visualization of GFP in dry seed was hampered by autofluorescence.
Una plántula de papa diploide derivada del cruzamiento entre un polinizador inductor de haploides y un clon altamente regenerativo,
clon de
Solarium phureja fue transformada utilizando
Agrobacterium tumefaciens LBA4404 con una construcción que lleva el gen de resistencia a la kanamicina (
hptII) y al
S- GFP (proteína fluorescente verde). De tres discos de hoja se regeneraron 17 plantas diploides y 12 tetraploides T
0. La expresión GFP fue observada en hojas, tubérculos, flores y embriones de plantas transformadas. Después de la autopolinización
de diploides T
0, se encontró que 879 T
1 expresaron GFP sobre una amplio rango continuo, basado en mediciones hechas con un medidor de GFP. La segregación de la expresión
de GFP en T
1 indicó que los transformantes posiblemente contienen dos copias del gen GFP. En tres de cinco tetraploides T
0, la proporción de segregación 15:1 de la expresión GFP: tipo silvestre en T
1 dio evidencia de una inserción simplex de una doble copia del trasgen. Una de segregación de 35 GFP: 1 tipo silvestre en
la cuarta familia tetraploide T
1 da evidencia a la probable inserción duplex de una sola copia. El potencial de usar GFP como marcador para evitar la selección
de semilla híbrida transgénica después del intento de la extracción haploide, depende de una fácil visualización de las semillas
GFP positivas, de tal manera que se puedan tamizar para haploidía las relativamente pocas semillas no transgénicas. La expresión
estable de GFP se encontró en diversos tejidos de seis diploides transgénicos; sin embargo, la visualización de GFP en semilla
seca fue impedida por autofluorescencia.
Additional key words genetic transformation - Sokmum tuberosum - pseudogamy - inbreeding depression - anther culture - Solanum phureja