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Abstract

A diploid potato seedling derived from a cross between a haploid-inducing pollinator and a highly regenerable clone ofSolatium phureja was transformed usingAgrobacterium tumefaciens LBA4404 with a construct bearing kanamycin resistance (hptII) and theS- GFP (green fluorescent protein) gene. From three leaf disks, 17 diploid and 12 tetraploid T0 plants were regenerated. GFP expression was observed in leaves, tubers, flowers and embryos of transformed plants. After self-pollination of T0 diploids, 879 T1 were found to express GFP over a wide continuous range, based on measurements using a GFP meter. Segregation of GFP expression in the T1 indicated that the diploid primary transformants likely contained two copies of the GFP gene. For three of five tetraploid T0, 15:1 segregation ratios of GFP expression:wild type in the T1 supported double copy simplex insertion of the transgene. A segregation ratio of 35 GFP:1 wild type in a fourth tetraploid T1 family supported the likelihood of a single copy duplex insertion. The potential of using GFP as a marker to select against transgenic hybrid seeds following attempted haploid extraction depends upon facile visualization of GFP positive seeds so that the relatively few nontransgenics can be screened for haploidy. Stable GFP expression was found in various tissues of six transgenic diploids; however, visualization of GFP in dry seed was hampered by autofluorescence.
Una plántula de papa diploide derivada del cruzamiento entre un polinizador inductor de haploides y un clon altamente regenerativo, clon deSolarium phureja fue transformada utilizandoAgrobacterium tumefaciens LBA4404 con una construcción que lleva el gen de resistencia a la kanamicina (hptII) y alS- GFP (proteína fluorescente verde). De tres discos de hoja se regeneraron 17 plantas diploides y 12 tetraploides T0. La expresión GFP fue observada en hojas, tubérculos, flores y embriones de plantas transformadas. Después de la autopolinización de diploides T0, se encontró que 879 T1 expresaron GFP sobre una amplio rango continuo, basado en mediciones hechas con un medidor de GFP. La segregación de la expresión de GFP en T1 indicó que los transformantes posiblemente contienen dos copias del gen GFP. En tres de cinco tetraploides T0, la proporción de segregación 15:1 de la expresión GFP: tipo silvestre en T1 dio evidencia de una inserción simplex de una doble copia del trasgen. Una de segregación de 35 GFP: 1 tipo silvestre en la cuarta familia tetraploide T1 da evidencia a la probable inserción duplex de una sola copia. El potencial de usar GFP como marcador para evitar la selección de semilla híbrida transgénica después del intento de la extracción haploide, depende de una fácil visualización de las semillas GFP positivas, de tal manera que se puedan tamizar para haploidía las relativamente pocas semillas no transgénicas. La expresión estable de GFP se encontró en diversos tejidos de seis diploides transgénicos; sin embargo, la visualización de GFP en semilla seca fue impedida por autofluorescencia.

Additional key words  genetic transformation - Sokmum tuberosum - pseudogamy - inbreeding depression - anther culture - Solanum phureja

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